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TUNEL法是DNA末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记的方法。这种方法在科学研究中已被广泛使用。但是由于影响DNA断裂的因素很多，TUNEL检测中的操作不恰当可能会引起假阳性或者假阴性的结果，不能体现正确的实验结果，从取材、组织处理、染色到结果判定，有这些操作细节需要警惕~
科研
细胞凋亡检测实验之《TUNEL染色》
做实验
TUNEL法检测细胞凋亡，高手带你进阶
取材方式对TUNEL染色的影响动物实验一般有以下三种方式进行取材:
1麻醉处死后取材是将动物用麻醉剂麻醉后断头或脱颈椎处死后取材。优点是取材速度快，缺点是动物死亡后会导致脏器的淤血。
2麻醉后心脏灌流取材是将动物麻醉后先用生理盐水从主动脉灌流，待动物体内血液冲洗干净后再用固定剂进行灌流，直到动物身体僵硬死亡，这种取材方式能最大限度地使动物组织器官及时得到固定，缺点是不能取血，无法获得血液标本。
3麻醉后腹主动脉取血后再取材是将动物麻醉后，先用注射器从腹主动脉将血液抽出，再进行取材。优点是能同时获得血液和组织脏器多种标本，缺点是动物取血后会导致脏器的失血性反应，某些抗原抗体（如磷酸化等一些易被激活的抗体）会产生一定的影响。
这几种取材方法中我们提倡使用第二种，可以将组织在未离体的情况下先行固定，极大地保留了组织的原始状态，能真正体现实验结果的准确性。第一种和第三种方法取材，动物脏器处于失血或瘀血状态，会产生一定的应激反应，会影响实验结果的稳定性和可靠性。
取材大小对TUNEL染色的影响取材大小直接影响固定剂穿透组织的速度。即使是动物组织也不要过大，更不能将整个脏器直接放入固定剂内。如肝脏取材只取1-2叶肝脏即可，并将其切成约5mm左右的一段或者两段，待24h后再二次取材，切成2-3mm厚度的组织块。肺脏和大脑也是一样。肾脏取材后要将肾脏冠状面剖开，待初步固定后再二次取材。消化道的取材要用生理盐水将内容物轻轻清洗干净再取材。其它组织如胸腺、甲状腺、气管、脑垂体等可直接放入固定液内。
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固定剂的选择对TUNEL染色的影响由于取材后的组织还要进行免疫组化等其它指标的检测，必须先进行固定，石蜡包埋。含有甲醛的固定剂及组织透明过程中使用的二甲苯都会影响DNA的结构，破坏DNA链，使之断裂[1]。我们平时经常使用的10%的中性甲醛或4%的多聚甲醛固定液，甲醛能使DNA断裂，容易造成假阳性结果[2]。因此我们推荐使用含有乙醇的Carnoy固定液，它穿透能力强，可很好的固定细胞质和细胞核，有效保证组织抗原抗体的稳定性的同时也能有效保证细胞核内DNA与RNA的结构。
组织离体后的缺血时间对染色的影响即组织取材后到放入固定剂的时间间隔。如果间隔时间过长，组织离体缺血缺氧会发生变性甚至坏死，DNA也会断裂、溶解影响实验结果[3]。动物实验组织取材后往往需要称重等操作，会延长组织的离体缺血时间。我们认为组织离体后到放入固定剂的时间越短越好，最好的办法是组织的原位灌注固定，但如果条件不允许也不要超过60min。
固定时间的长短对TUNEL染色的影响组织在固定剂内时间过长与过短均可影响蛋白质和核酸的结构。甲醛可使DNA断裂，因此组织在甲醛或多聚甲醛内的时间不宜超过72h。Carnoy固定液虽然不含甲醛，但是由于所含的氯仿具有一定的挥发性，时间过长固定液的效果降低，因此也控制在72h内为佳。
东澳服务服务项目对各类组织样品的组织切片做凋亡检测。
实验流程脱蜡水化→固定→洗涤→通透→洗涤→预平衡→用荧光素-12dUTP标记DNA断链→终止反应→封片镜检
示例细胞生物学
分子生物学
形态病理学
动物模型
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